聚丙烯酰胺凝胶DNA回收试剂盒说明书

  PolyGel Extraction Kit

 目录号：YJ0526

 运输条件：室温（15-25℃）。

 保存条件：室温（15-25℃）。

 组分说明

                    Cat. No.                     YJ0526

                    Kit Size                        50

                    Buffer PL                     100 ml

                    Diffusion Buffer              30 ml

                    Buffer PS                     15 ml

                    Buffer PW（concentrate）        10 ml

                    Buffer EB                     10 ml

                    Spin Column DM                  50

                    Filter                          50

                    Collection Tube（2 ml）          100

              本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途  

产品简介

　　本试剂盒采用新型硅基质膜及特殊的缓冲液系统，高效专一结合  DNA，可从聚丙

烯酰胺凝胶中高效回收 DNA，并可最大限度去除引物、酶、矿物油等杂质，获得高纯

度的DNA，满足多种实验要求。本试剂盒可回收50 bp-50 kb的DNA片段，能有效避免

大片段DNA在纯化过程中被切断，每个吸附柱可最高吸附20 μg的DNA，且DNA回收效率高达90%。由本试剂盒回收纯化的DNA可直接用于酶切，连接，PCR扩增、DNA测

序等分子生物学实验。

自备试剂：无水乙醇，离心管。

实验前准备及重要注意事项

1．第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。

2．使用前请检查Buffer  PL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀现象，可在37℃

   水浴几分钟，即可恢复澄清。

3．电泳时最好使用新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果。

4．切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对DNA造成损伤。

5．回收率与初始DNA量和洗脱体积有关。

6．离心步骤均为使用常规台式离心机室温下进行离心。

操作步骤

1．将单一的目的DNA条带从聚丙烯酰胺凝胶中切下（尽量切除多余部分）放入干净的

   离心管（自备）中，称取重量。

2．将凝胶充分捣碎，向凝胶中加入1-2倍体积的Diffusion  Buffer（如100mg凝胶加入

   100-200 μl Diffusion Buffer），75℃孵育30分钟。

3．12,000  rpm（~13,400×g）离心1分钟，小心吸取上清，将之加入到已装入收集管的

   Filter（过滤柱）中，12,000 rpm离心1分钟，将离心所得的滤液收集在收集管中。

4．向滤液中加入3倍体积的Buffer PL；当回收的目的片段<100 bp时，加入6倍体积的

   Buffer PL，上下颠倒混匀。

   注意：此时可以检测其pH值，若pH值大于7.5，可向含有DNA的胶溶液中加10-30 μl 的3 M醋酸钠（pH 5.0）将pH值调到5-7。

5．柱平衡：向已装入收集管（Collection Tube）中的吸附柱（Spin Column DM）中加

   入200 μl Buffer PS，12,000 rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新

   放回收集管中。

6．将步骤4中所得溶液加入到已装入收集管的吸附柱中，室温放置2分钟，12,000 rpm

   离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。

   注意：吸附柱容积为700 μl，若样品体积大于700 μl可分批加入。

7．向吸附柱中加入650 μl Buffer PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000

   rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。

   注意：如果纯化的DNA 是用于盐敏感的实验，例如平末端连接实验或直接测序，建议加入Buffer PW后静置2-5分钟再离心。

8．将吸附柱放回收集管中，12,000 rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置

   于室温数分钟，以彻底晾干。

   注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、

   PCR等）。为确保下游实验不受残留乙醇的影响，建议将吸附柱开盖，置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。

9．将吸附柱放到一个新离心管（自备）中，向吸附膜中间位置悬空滴加  20 μl Buffer

   EB，室温放置2分钟；  12,000 rpm离心2分钟，收集DNA溶液。-20℃保存DNA。

   注意：1）洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液，应保证其pH值在7.0-8.5（可以用NaOH将水的pH值调到此范围）。

   2）为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新加回吸附柱中，重复步骤9。

   3）洗脱体积不应小于20 μl，体积过少影响回收效率。

   4）如果使用TE洗脱，需要考虑其中含有的EDTA是否会影响后续的酶促反应。

   5）回收大于10  kb的DNA片段时，Buffer  EB应在50℃水浴中预热，适当延长吸附和洗脱时间，可增加回收效率。

相关产品信息

                   产品应用                                     产品名称

                                     YJ0520     微量DNA产物纯化试剂盒

                                     YJ2301     快速DNA产物纯化试剂盒

                  DNA纯化

                                     YJ0528     96DNA产物纯化试剂盒

                                     YJ0517     大量DNA产物纯化试剂盒

                                     YJ0524     微量琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒

                                     YJ2302     快速琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒

                    胶回收

                                     YJ0526     聚丙烯酰胺凝胶DNA回收试剂盒

                                     YJ0518     大量琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒

                                     YJ0519     通用型DNA纯化试剂盒

               DNA纯化/胶回收

                                     YJ2359     磁珠通用型DNA纯化试剂盒

                寡核苷酸纯化               YJ0522     寡核苷酸纯化试剂盒

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