HUVEC(人脐静脉内皮细胞)是研究血管生成的核心模型细胞,其高增殖能力和成管特性可模拟肿瘤血管新生过程。通过将HUVEC接种于基质胶(模拟基底膜微环境),细胞可在体外形成复杂的三维管状网络结构,广泛用于:
✅ 抗血管生成药物筛选
✅ 肿瘤微环境机制研究
✅ 血管生成相关基因/信号通路验证
PART.02
实验步骤
实验前一天将Ceturegel®基质胶置于冰盒中,放入 4℃冰箱,使胶能过夜缓慢融化。
开始实验前,将Ceturegel®基质胶始终保持放在冰盒中。
准备24孔板,于每孔中加入100µL - 150µL Ceturegel®基质胶,避免产生气泡。在37℃培养箱中放置30 min - 1 h。(注意枪头要垂直于内孔的正上方加入 Ceturegel®基质胶,防止有孔壁残留基质胶。若是孔的底部没有铺满胶,可以晃动一下孔板,使底部铺胶均匀)。
当HUVEC细胞长满70 ~ 80%时,消化下来,并用含10%FBS的DMEM重悬,计数,使每孔加入1.2×105细胞/孔,重复三孔。
37℃培养箱孵育,每4 h观察1次,4 - 18 h可见血管生成。
小心的移除上孔内培养基,注意不要碰到胶或者细胞网络。加入Calcein染料进行染色。
结果观察。
PART.03
实验结果
图.血管生成结果及染色图
PART.04
常见问题及解答
为什么我的成管实验中细胞 不能形成连续的网格?
QA
①建议使用3-5代状态较好且融合度70%-80%的HUVEC细胞进行成管试验,此时细胞成管能力比较强。
②超过15代HUVEC细胞成管能力明显降低。
③细胞数量过少会使细胞无法形成连续的网络。
成管实验到底需要几个小时?
QA
成管时间与细胞状态密切相关。细胞状态好时成管时间短。建议第一次实验时,每4个小时观察一次。
PART.05
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货号 |
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