乳酸杆菌属通用染料法荧光定量PCR试剂盒
产品名称: 乳酸杆菌属通用染料法荧光定量PCR试剂盒
英文名称: Lactococcus spp.
产品编号: HZ14-32300
产品价格: 0
产品产地: 中国/上海
品牌商标: HZbscience
更新时间: 2023-08-17T10:24:20
使用范围: null
- 联系人 : 鲍丽雯
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- 所在区域 : 上海
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乳酸杆菌属通用染料法荧光定量PCR试剂盒产品及特点 :
聚合酶链式反应(PCR)是体外酶促合成特异DN**段的一种方法,由高温变性、低温退火(复性)及适温延伸等几步反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。本产品就是为满足这一需求根据 PCR 原理开发的产品,它具有下列特点:
1. 一管式操作,用户只需要提供样品即可。
2. 根据大豆热休克蛋白基因保守区域设计引物,能专一性检测出样品中的大豆成分,但不能检测其他非大豆成分。
3. 快速,整个检测过程(按一个样品计)所需时间仅为 2.0 小时。
4. 只需要普通 PCR 仪和凝胶电泳仪,无需配置贵重仪器设备。
5. 对混合样品中大豆成分的检测下限为 0.1%,对样品中大豆成分的核酸检测下限为 1.0ng/µL。
6. 本只能用于科研,足够 50 次 40uL 体系的常规 PCR。
乳酸杆菌属通用染料法荧光定量PCR试剂盒包装规格及成分:
编号 |
成分 |
十孔盒包装(去纸托) |
试剂一 |
2×PCR MagicMix |
1mL(亮黄盖) |
试剂二 |
源性成分 PCR 引物混合液 |
100 uL(白盖) |
试剂三 |
源性成分 PCR 阳性对照 |
50 uL(黄盖) |
试剂四 |
超纯水 |
1 mL(本色盖) |
试剂五 |
DNA 释放剂试用装 |
50 次(成分见下) |
试剂六 |
免 DNA 提取试剂溶液 A 成分一 |
50 uL(白盖) |
试剂七 |
免 DNA 提取试剂溶液 A 成分二 |
100uL(绿盖) |
试剂八 |
免 DNA 提取试剂溶液 B |
400 uL(红盖) |
试剂九 |
使用手册 |
1 份 |
运输及保存:低温运输,-20℃保存,有效期一年。使用本试剂盒提供的阳性对照时,由于其浓度较高,一定要注意不要污染其他试剂和成分。在专门的区域操作。
自备试剂:DNA 模板。
乳酸杆菌属通用染料法荧光定量PCR试剂盒使用方法:
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化样品的 DNA,本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
2. 如果有 N 个样品,则需要进行 N+2 个样品提取,多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。如果用本试剂盒自带的DNA 释放剂试用装。则按下面步骤操作:
3. 配制溶液 A 工作液。以配制 1mL 工作液(足够 10 个样品)为例:在一干净塑料管中加入 10uL 溶液 A 成分一,20uL 溶液 A 成分二和 970uL 超纯水,充分混合均匀即可。溶液 A 工作液可室温放置,但最好在一周内用完,不要长期放置。一次检测一个样品需要 100uL 溶液 A 工作液,1mL 工作液足够 10 个样品。如果待测样品数量为其他数字,配制的溶液 A 工作液的体积需要做相应的调整。
4. 在标记好的 N+2 个离心管中,加入 1-5mg 固体样品(半粒芝麻大小)或 5uL 液体样品待测样品。在样品制备阳性对照中加入 5uL 阳性对照,在样品制备阴性对照中加入 5uL 水。
5. 在每个管中加入 100 uL 溶液 A 工作液,确保固体样品被溶液淹埋,如果是液体样品则震荡混匀。
6. 95℃保温 10 分钟。
7. 待冷却到常温后加入 10uL 溶液 B 并混匀得 DNA 释放液。每个样品得到的 DNA释放液足够进行 50-100 次 PCR。
二、乳酸杆菌属通用染料法荧光定量PCR试剂盒 设置 PCR 反应(40 uL 体系)
8. 在 N+2 个 PCR 管中加入下列成分,下面以样品数为 1 举例(注意:如果一次使用DNA 释放剂,每个样品设置两个模板用量的 PCR 反应,两个反应的模板使用量差 10 倍,由此确定用量,以后就用效果好的那个模板用量):
成份 |
样品(用量1) |
样品(用量2) |
阳性对照 |
阴性对照 |
即用型 PCR Mix 3.0 |
20 uL |
20 uL |
20 uL |
20 uL |
源性 PCR 引物混合液 |
2 uL |
2 uL |
2 uL |
2 uL |
制备的样品 |
18 uL |
2 uL |
无 |
无 |
样品制备阳性对照 |
不加 |
不加 |
2 uL |
不加 |
样品制备阴性对照 |
不加 |
不加 |
不加 |
2 uL |
超纯水 |
不加 |
16 uL |
16 uL |
16 uL |
9. 轻柔混匀后上机,按下面参数进行 PCR。
过程 |
温度 |
时间 |
预变性 |
94℃ |
10分钟 |
PCR 反应 (35 个循环) |
94℃ |
30s |
60℃ |
30s |
|
72℃ |
30s |
|
延伸 |
72℃ |
7分 |
10. 电泳检测 PCR 产物。预期的 PCR 产物长度为 216bp。阳性对照必须有此条带出